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密度阻滞法纯化人外周血单核细胞
来源:凯瑞力枫  发布时间: 2013-03-06 15:06

试剂和器材: 
1. 抗凝血剂:100mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L柠檬酸钠;
2. Hepes缓冲生理盐水(HBS):8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH,pH7.4;
3. 淋巴细胞分离液(例如LymphoprepTM或NycoPrepTM1.077)或OptiPrepTM,用Hepes缓冲生理盐水稀释(分别加入5倍体积和17倍体积);
4. 台式低速离心机;
5. 巴斯德吸管(短型和长型);
6. 5—10ml规格注射器和金属套管针;

实验方法:
1. 用乙二胺四乙酸(2mmol/L终浓度)或柠檬酸钠(38g/L终浓度)作为抗凝剂来收集静脉血;
2. 用等体积的Hepes缓冲生理盐水稀释血液,反复多次轻轻颠倒;
3. 用塑料巴斯德吸管,取6ml稀释过的血液加入到离心管中3ml的选定介质之上;
4. 20℃,以700g离心15min(LymphoprepTM)或700g离心20min(NycoPrepTM1.077或碘克沙醇溶液);
5. 用缓慢减速程序或不制动的方法使转子减速;
6. 用巴斯德吸管在界面上收集细胞;
7. 用2倍体积的Hepes缓冲生理盐水稀释并且以200g—500g离心15min收集细胞;



 

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