本流式细胞仪的各通道所对应荧光染色/料如下 :
一. 流式细胞仪软件操作步骤
下述描述仅限于软件操作的记录操作
1. 开机(按流式细胞仪机房操作指南操作);
2. 打开 CellQuest Pro (流氏细胞仪操作)软件
→依据快捷菜单的指示,画出数个门( “黑”图 )(一般至少是3个),即数据显示与记录图。
3. 选用菜单Acquire 下拉菜单中的connect (使计算机与流式仪相连)
4. 设定数据存贮位置
选用菜单Brown Untitle下拉菜单下的 Data,寻找适宜位置,建立文件夹
→注意下拉菜单下的第二项选择
→应用New键和 Choose键(以确定所得数据的存储位置)
→在存贮时,点击Brower, 在对话框中有两个 Change按钮
第二个Change按钮用于改变每个数据存储时的文件名字依
5. 应用apple 键+数字键1、2、3、4→出现4个对话框 (用于设计仪器记录时的记录条件),
即 Detector, Threshold, Compensation and Status
上述四项在做双重 ~ 四重染色时要用到(见下文)。
6. 设定通道名字
→在所画“黑”图的通道的名字上直接点击, 随之更改通道的名称(据你的实验而定)
如: CD4,Fox3, CD 121和NK1.1等。
7. 设定、修改和限定门 Gate
利用所画“黑”图之左边的快捷键,画出几个门,如:门R1, R2和R3等以设定门Gate
在菜单Gate下拉菜单下,设定 (在如下的对话框中进行设定) 修改和限定门的范围
设定的参数是根据我们每个人的具体实验而定,and 是同时满足的意思。据此,限定了了所记录细胞的种类。
8. 请熟悉所画的“黑”图之左边的快捷键
请找到画阳性与阴性区域的 “十字线”快捷键
9. 设定记录模式(根据你的需要,也可以应用同一模式设定分析模式)
找到Inspector,得到如下的对话框
10.设定补偿等
在Detector对话框中的Mode项的选择
11. 设定所记录细胞数目
从 Acquisition & Storage 下拉菜单中寻找,
12. 实时显示所记录细胞数
从 Acquisition & Storage 下拉菜单中寻找
13. 如何记录? 选用菜单Aquiresition Control命令进行记录,出现下述对话框:
当Setup键激活时:进行仪器状态的调试(此时对照组的细胞流经探测管);
换言之,此时不进行数据的记录。
当Acquire键激活:进行数据的记录(此时实验组的细胞流经探测管);
数据记录完后,要应用同一对话框中的Save键进行数据储存。
20. 关机(使电脑与流式仪分开):
在最左侧的菜单中,找到下拉菜单,寻找logout
21. 关机后按照流式细胞仪室的指南操作进行
注意:加压阀钮(工作状态时它应对向你,关机后的反向与你)